厭氧培養(yǎng)箱使用

（一）操作室厭氧環(huán)境形成：

1. 按使用要求放置好必要的附件和器具，并向操作室內(nèi)放入二個(gè)無(wú)毒塑料袋；

2. 通電源開(kāi)照明燈，開(kāi)溫控儀，調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度；

3. 操作室內(nèi)放入1000g鈀粒（封閉）和500g干燥劑，并放入美蘭指示劑（封閉）；

4. 關(guān)緊取樣室內(nèi)外門(mén)，并抽真空校驗(yàn)；

5. 操作室內(nèi)*次置換（氮?dú)庵脫Q）：

  A. 先用橡皮管插入操作室內(nèi)進(jìn)氣口，另一頭插入塑料袋；

  B. 接通氮?dú)膺M(jìn)氣路，打開(kāi)氮?dú)饪刂崎y1，使二只塑料袋充足氮?dú)?，關(guān)閉閥門(mén)1，然后扎緊袋口；

  C. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊；

  D. 把塑料袋內(nèi)氮?dú)鉂u漸放于操作室內(nèi)，至全部放出。

6. 操作室第二次置換（氮?dú)庵脫Q）重復(fù)一次充氮過(guò)程，取樣室先抽真空，并注意隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。

7. 操作室第三次置換（混合氣體置換）：（混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%）

  A. 調(diào)換氣路打開(kāi)混合氣閥3進(jìn)氣，充氣時(shí)取樣室先抽真空，并隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣；

  B. 混合氣充滿塑料袋后，關(guān)掉混合氣閥并打開(kāi)閥5，使混合氣經(jīng)過(guò)流量計(jì)，調(diào)整流量計(jì)，流量為每分鐘10ml左右；

  C. 把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi)；

  D. 通過(guò)三次換氣后，操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。

8. 操作室內(nèi)打開(kāi)粑粒除氧劑，接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧，一小時(shí)后開(kāi)美蘭指示劑（美蘭安瓶）觀察其變色情況，不變色為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境；

9. 開(kāi)紫外線滅菌燈，室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理，滅菌時(shí)間按具體實(shí)驗(yàn)自定。

 

（二）菌種的置入和培養(yǎng)：

1. 檢查取樣室內(nèi)門(mén)并關(guān)緊之；

2. 打開(kāi)取樣室外門(mén)，將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門(mén)；

3. 取樣室充氮置換三次過(guò)程：打開(kāi)真空泵，先抽真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后人工打開(kāi)氮?dú)忾y2進(jìn)氣，使指針回復(fù)零位，關(guān)掉閥2。第二次重復(fù)操作一次。第三次操作時(shí)，使真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后打開(kāi)閥4進(jìn)混合氣，使指針回復(fù)零位，后掉閥4。取樣室充氮置換三次過(guò)程結(jié)束；

4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù)；

5. 取樣室內(nèi)外門(mén)開(kāi)啟、關(guān)緊，再抽低真空度100ml汞柱（13kPa）檢驗(yàn)；

6. 厭氧培養(yǎng)箱需要長(zhǎng)期連續(xù)使用的條件：

  A. 每天在操作室內(nèi)打開(kāi)美蘭指示劑觀察，如不正常就必須重新?lián)Q氣；

  B. 要長(zhǎng)期連續(xù)輸入微量的混合氣體，使補(bǔ)進(jìn)的氮?dú)饽芎臀⒘康难踅Y(jié)合通過(guò)催化吸收，保證室內(nèi)厭氧狀態(tài)，補(bǔ)入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右；

  C. 連續(xù)培養(yǎng)運(yùn)行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。

7. 操作室內(nèi)培養(yǎng)室內(nèi)室溫度可任意選擇和控制。

8. 混合氣瓶、氮?dú)馄枯敵鰤毫φ{(diào)整：調(diào)節(jié)減壓閥，使輸出壓力0.1Mpa左右。

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